t载体 什么是T载体

什么是T载体

通过克隆甘露聚糖酶基因到pMD-18T载体构建了质粒pMD-18Tman2XcmI,克隆的甘露聚糖酶基因两侧各引进了一个特定的XcmI

酶切位点;用XcmI酶切质粒pMD-18Tman2XcmI可以制备T载体.因为甘露聚糖酶基因作为填充片段和筛选标记受半乳糖苷酶基因启动子的控制,甘露聚糖酶能够表达,从而水解甘露聚糖产生水解圈,指示转化了部分酶切质粒的背景菌落.此外,在甘露聚糖酶基因中存在第3个不同序列的XcmI酶切位点,因此残余的甘露聚糖酶基因引起的背景可以进一步降低.抽提大量质粒贮存,随时制备T载体使用,增加了克隆的稳定性.该T载体克服了一般T载体质量不稳定,费钱,克隆效率低,假阳性高的缺点.使用构建的T载体完成了10个基因的克隆,结果表明重组效率达到了90％～100％.

T载体是什么？

不是T噬菌体，你错了，T载体是一种质粒载体

T载体的作用是什么？克隆时为什么要用T载体？

肯定是开环，不然怎么连接。连接的原理就是试剂盒中的载体pmd19-t是已经经过内切酶ecorv反应了的，并且在露出t的一端继续添加几个t，而我们的pcr反应中，在聚合酶的作用下，会在一端添加a，这样它们在反应中就很快连接成功。